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研玘生物-細(xì)胞培養(yǎng)中發(fā)生污染如何預(yù)防或清除?

發(fā)表時間:2024-03-22
以下是研玘生物細(xì)胞培養(yǎng)中發(fā)生污染如何預(yù)防及清除的解答,有不清楚的小伙伴可咨詢在線客服

一、預(yù)防污染



預(yù)防是防止細(xì)胞培養(yǎng)過程中發(fā)生污染的辦法。只有在細(xì)胞培養(yǎng)前做好預(yù)防工作,才能將發(fā)生污染的可能性降到最小程度。



一般預(yù)防可以從以下幾方面著手:

   操作者需要具備很強的責(zé)任心,并且細(xì)心穩(wěn)重、操作技術(shù)熟練。進(jìn)無菌室前要用肥皂洗手或用5%新潔爾滅浸泡5分鐘,按規(guī)定穿隔離衣。進(jìn)入后關(guān)好門,坐下后盡量少走動。工作開始前用75%酒精棉球擦手、擦瓶口和燒灼瓶口,嚴(yán)格檢查器材、溶液和培養(yǎng)物,不要把污染品或未經(jīng)消毒的物品帶入無菌室內(nèi),以免造成大批污染。



  操作者動作要輕,必須在火焰周圍無菌區(qū)內(nèi)打開瓶口,并將瓶口轉(zhuǎn)動燒灼。(操作時盡量不要談話,若打噴嚏或咳嗽應(yīng)轉(zhuǎn)向背面)


   操作時要常更換吸管,切勿一直使用同一根吸管。一旦發(fā)現(xiàn)吸管口接觸了手和其他污染物品應(yīng)及時丟棄。實驗完畢后及時收拾,保持實驗室的清潔整齊,最后用消毒水浸泡的紗布擦臺面。



1. 物品、用品消毒滅菌



細(xì)胞培養(yǎng)所用物品清洗、消毒要che底,各種溶液滅菌除菌要仔細(xì),并在無菌試驗陰性后才能使用。操作室及剩余的無菌器材要定期清潔消毒滅菌。



2. 防止細(xì)胞交叉污染



(1) 在進(jìn)行多種細(xì)胞培養(yǎng)操作時,所用器具要嚴(yán)格區(qū)分,做上標(biāo)記便于辨別。并按順序進(jìn)行操作,避免一起進(jìn)行時發(fā)生混亂。



(2) 在進(jìn)行換液或傳代操作時,注射器和滴管不要觸及細(xì)胞培養(yǎng)瓶瓶口,以免把細(xì)胞帶到培養(yǎng)液中污染其他細(xì)胞。



(3) 所有細(xì)胞一旦購置,或從別處引入、自己建立,均應(yīng)及早留種凍存,一旦發(fā)生污染可棄之復(fù)蘇,重新培養(yǎng)。



二、污染的清除


  培養(yǎng)細(xì)胞一經(jīng)污染,多數(shù)都會較難處理。如果污染細(xì)胞價值不大,建議丟棄;有細(xì)胞株留存的或可購置的,可在尋找原因后消毒操作室,復(fù)蘇或重新購置細(xì)胞,再培養(yǎng)。若污染細(xì)胞價值較大,又難于重新得到,可采取以下辦法清除:



1. 使用抗生素


抗生素對殺滅細(xì)菌的效果較好。聯(lián)合用藥比單獨用藥效果好;預(yù)防用藥比污染后再用藥效果好。預(yù)防用藥一般用雙抗生素,污染后清除用藥需采用大于常用量5~10倍的沖洗法,于加藥后作用24~48小時,再換常規(guī)培養(yǎng)液。此法在污染早期可能有效。所用抗生素品種除青-霉素、鏈-霉素外,還可用慶-大霉素、卡-那霉素、多粘菌素、四環(huán)素、制-霉菌素等。常用400~800μg/mL卡-那霉素或200μg/mL四環(huán)素處理,每隔2~3日換液1次,傳1~2代進(jìn)行治療。



2. 使用支原體特異性血清



用5%的兔支原體免疫血清(血凝效價1:320以上)可去除支原體污染,因特異抗體可抑制支原體生長,故經(jīng)抗血清處理后11天即轉(zhuǎn)為陰性,并且5個月后仍為陰性。(此法比較麻煩,不如用抗生素方便、經(jīng)濟(jì))



3. 加溫處理



將污染的組織培養(yǎng)物放在41℃培養(yǎng)18小時,可殺死支原體,但對細(xì)胞有不良影響。所以在處理前要進(jìn)行預(yù)試驗,摸索能最大限度殺死支原體又對細(xì)胞影響最小的加熱時間。(此法有時不可靠,若先用藥物處理后,再以41℃加溫處理效果更佳。)



4. 其他方法

除了上述去除污染的方法外,還有動物體內(nèi)接種除菌法、巨噬細(xì)胞吞噬法、污染培養(yǎng)瓶中加溴尿-嘧啶再用光照射的方法及過濾法等,但均較麻煩,且效果不確定。所以一旦支原體污染,除非有特別重要價值,一般均棄之重新培養(yǎng)。
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