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大鼠雷帕霉素靶蛋白C2（mTORC2)ELISA試劑盒
用純化的抗體包被微孔板,制成固相載體,往包被該指標(biāo)抗體的微孔中,依次加入標(biāo)本,標(biāo)準(zhǔn)品、HRP標(biāo)i的檢測(cè)抗體。經(jīng)過(guò)洗滌后用底物TMB顯色。TMB在過(guò)氣化物酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成最終的黃色。顏色的深淺和樣品中的該指標(biāo)呈正相關(guān)用酶標(biāo)儀在450nm波長(zhǎng)下測(cè)定吸光度(OD值),計(jì)算樣品濃度。
大鼠雷帕霉素靶蛋白C2（mTORC2)ELISA試劑盒組成

名稱	96孔配置	48孔配置	備注
微孔酶標(biāo)板	12孔*8條	12孔*4條	無(wú)
標(biāo)準(zhǔn)品	0.3ml*6管	0.3ml*6管	無(wú)
樣本稀釋液	6ml	3ml	無(wú)
檢測(cè)抗體-HRP	10ml	5ml	無(wú)
20x洗滌緩沖液	25ml	15ml	按說(shuō)明書(shū)稀釋
底物A	6ml	3ml	無(wú)
底物B	6ml	3ml	無(wú)
終止液	6ml	3ml	無(wú)
封板膜	2張	2張	無(wú)
說(shuō)明書(shū)	1份	1份	無(wú)
自封袋	1個(gè)	1個(gè)	無(wú)

 大鼠雷帕霉素靶蛋白C2（mTORC2)ELISA試劑盒   試劑的準(zhǔn)備

20×洗滌緩沖液的稀釋：蒸餾水按1：20稀釋，即1份的20×洗滌緩沖液加19份的蒸餾水。

洗板方法
1.手工洗板:甩盡孔內(nèi)液體,每孔,加滿洗滌液,靜置1min后用盡孔內(nèi)液體,在吸水紙上拍,如此洗板5次。
2.自動(dòng)洗板機(jī):每孔注入洗液350uL,漫泡1min,洗板5次。
自備物品
1.酶標(biāo)儀(450nm)
2.高精度加樣器及槍頭:0.5-10uL、2-20uL、 20-200uL、 200-1000uL
3.37“C恒溫箱

大鼠雷帕霉素靶蛋白C2（mTORC2)ELISA試劑盒操作步驟
1.從室溫平衡20min后的袋中取出所需板條,剩余板條用自封袋密封放回4C。
2.設(shè)置標(biāo)準(zhǔn)品孔和樣本孔,標(biāo)準(zhǔn)品孔各加不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)品504L;
3.樣本孔先加待測(cè)樣本10uL,再加樣本稀釋液40uL;空白孔不加。
4.除空白孔外,標(biāo)準(zhǔn)品孔和樣本孔中每孔加入辣根化物酶(HRP)標(biāo)記的檢測(cè)抗體1004L,用封板膜封住反應(yīng),37“C水浴鍋或恒溫箱溫育60min。
5,棄去液體,吸水紙上拍工每,加滿洗滌液 靜置1min,用去洗滌液,吸水紙上拍如此重復(fù)洗板5次(也可用洗板機(jī)洗板.
6.每孔加入底物A、B各50uL,37“C避光孵育15min。
7.每孔加入終止液50L,15min內(nèi),在450nm波長(zhǎng)處測(cè)定各孔的OD值。
樣品收集、處理及保存方法
1.血清:使用不含熱原和內(nèi)毒素的試管,操作過(guò)程中避免任何細(xì)胞刺激,收集血液后,3000轉(zhuǎn)離心10分鐘將血清和紅細(xì)胞迅速小心地分離
2.血漿EDTA、檸檬酸鹽或肝毒抗凝。3000轉(zhuǎn)離心30分鐘取上清。
3.細(xì)胞上清液:3000轉(zhuǎn)離心10分鐘去除顆粒和聚合物。
4.組織勻漿:將組織加入適量生理鹽水搞碎。3000轉(zhuǎn)離心10分鐘取上清。
5.保存:如果樣本收集后不及時(shí)檢測(cè),請(qǐng)按一次用量分裝凍存于-20C,避免反復(fù)凍融,在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。
結(jié)果判斷
繪制標(biāo)準(zhǔn)典線:在Exge工作表中,以標(biāo)準(zhǔn)品濃度作播少標(biāo),對(duì)應(yīng)OD值作縱坐標(biāo) 繪制出標(biāo)準(zhǔn)品線性回歸典線 按曲線方程計(jì)算各樣本濃度值。
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