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小鼠高2(HDL2)elisa試劑盒
用純化的抗體包被微孔板,制成固相載體,往包被該指標(biāo)抗體的微孔中,依次加入標(biāo)本,標(biāo)準(zhǔn)品、HRP標(biāo)i的檢測抗體。經(jīng)過洗滌后用底物TMB顯色。TMB在過氣化物酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成最終的黃色。顏色的深淺和樣品中的該指標(biāo)呈正相關(guān)用酶標(biāo)儀在450nm波長下測定吸光度(OD值),計(jì)算樣品濃度。
小鼠高2(HDL2)elisa試劑盒組成

名稱	96孔配置	48孔配置	備注
微孔酶標(biāo)板	12孔*8條	12孔*4條	無
標(biāo)準(zhǔn)品	0.3ml*6管	0.3ml*6管	無
樣本稀釋液	6ml	3ml	無
檢測抗體-HRP	10ml	5ml	無
20x洗滌緩沖液	25ml	15ml	按說明書稀釋
底物A	6ml	3ml	無
底物B	6ml	3ml	無
終止液	6ml	3ml	無
封板膜	2張	2張	無
說明書	1份	1份	無
自封袋	1個	1個	無

 小鼠高2(HDL2)elisa試劑盒   試劑的準(zhǔn)備

20×洗滌緩沖液的稀釋：蒸餾水按1：20稀釋，即1份的20×洗滌緩沖液加19份的蒸餾水。

洗板方法
1.手工洗板:甩盡孔內(nèi)液體,每孔,加滿洗滌液,靜置1min后用盡孔內(nèi)液體,在吸水紙上拍,如此洗板5次。
2.自動洗板機(jī):每孔注入洗液350uL,漫泡1min,洗板5次。
自備物品
1.酶標(biāo)儀(450nm)
2.高精度加樣器及槍頭:0.5-10uL、2-20uL、 20-200uL、 200-1000uL
3.37“C恒溫箱

小鼠高2(HDL2)elisa試劑盒操作步驟
1.從室溫平衡20min后的袋中取出所需板條,剩余板條用自封袋密封放回4C。
2.設(shè)置標(biāo)準(zhǔn)品孔和樣本孔,標(biāo)準(zhǔn)品孔各加不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)品504L;
3.樣本孔先加待測樣本10uL,再加樣本稀釋液40uL;空白孔不加。
4.除空白孔外,標(biāo)準(zhǔn)品孔和樣本孔中每孔加入辣根化物酶(HRP)標(biāo)記的檢測抗體1004L,用封板膜封住反應(yīng),37“C水浴鍋或恒溫箱溫育60min。
5,棄去液體,吸水紙上拍工每,加滿洗滌液 靜置1min,用去洗滌液,吸水紙上拍如此重復(fù)洗板5次(也可用洗板機(jī)洗板.
6.每孔加入底物A、B各50uL,37“C避光孵育15min。
7.每孔加入終止液50L,15min內(nèi),在450nm波長處測定各孔的OD值。
樣品收集、處理及保存方法
1.血清:使用不含熱原和內(nèi)毒素的試管,操作過程中避免任何細(xì)胞刺激,收集血液后,3000轉(zhuǎn)離心10分鐘將血清和紅細(xì)胞迅速小心地分離
2.血漿EDTA、檸檬酸鹽或肝毒抗凝。3000轉(zhuǎn)離心30分鐘取上清。
3.細(xì)胞上清液:3000轉(zhuǎn)離心10分鐘去除顆粒和聚合物。
4.組織勻漿:將組織加入適量生理鹽水搞碎。3000轉(zhuǎn)離心10分鐘取上清。
5.保存:如果樣本收集后不及時檢測,請按一次用量分裝凍存于-20C,避免反復(fù)凍融,在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。
結(jié)果判斷
繪制標(biāo)準(zhǔn)典線:在Exge工作表中,以標(biāo)準(zhǔn)品濃度作播少標(biāo),對應(yīng)OD值作縱坐標(biāo) 繪制出標(biāo)準(zhǔn)品線性回歸典線 按曲線方程計(jì)算各樣本濃度值。
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