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犬抗凝血酶Ⅲ（AT-Ⅲ）ELISA試劑盒檢測(cè)原理、操作步驟、注意事項(xiàng)如下：

1.原理:免疫分析是一種利用特定抗體與抗原或半抗原發(fā)生的高選擇性高特識(shí)別和結(jié)合原理,對(duì)待測(cè)抗體或者抗原進(jìn)行分析測(cè)定的方法,酶聯(lián)免疫吸附分析(下稱ELISA)是免疫分析的一種,分三個(gè)部分組成:免疫識(shí)別,信號(hào)輸出和數(shù)據(jù)處理。

2.步驟:免疫識(shí)別是在聚苯制成的96孔板上包被抗體,而后利用抗體識(shí)別待測(cè)的抗原(通常是的蛋白質(zhì)生物標(biāo)記物,病毒,細(xì)菌等等,從復(fù)雜待測(cè)液中將抗原吸附到96孔板表面。接著用帶有辣根化酶(Horseradish Peroxidase, HRP)、熒光或放射性標(biāo)記的抗體通過直接或者間接的方式輸出識(shí)別信號(hào)。最-后利用信號(hào)強(qiáng)度,標(biāo)準(zhǔn)樣品濃度梯度等信息計(jì)算得出待測(cè)樣中目標(biāo)抗原的濃度。

3.分類:根據(jù)免疫識(shí)別和信號(hào)輸出方式的不同,ELISA可以分為雙抗體夾心法、直接免疫競(jìng)爭(zhēng)法和非直接免疫競(jìng)爭(zhēng)法等等。其中雙抗體夾心法在商業(yè)應(yīng)用上最常見。

犬抗凝血酶Ⅲ（AT-Ⅲ）ELISA試劑盒注意事項(xiàng):

1.所有的操作過程一般都用排槍處理,在操作過程中,排槍吸兩檔打一檔,會(huì)防止氣泡的產(chǎn)生,并且操作時(shí)一定要保證槍頭每步都要插緊,選擇配套的槍頭尤為重要,槍頭容易掉,影響實(shí)驗(yàn)效果,此外每一步都要看好槍頭的頁面要平齊,避免槍頭松動(dòng)自己卻不知。

2.在處理稀釋標(biāo)準(zhǔn)品的過程中,要在渦旋儀上點(diǎn)一下,使混勻,但振蕩過程不宜過長,防止出現(xiàn)蛋白質(zhì)降解變性的現(xiàn)象

3.二抗的稀釋濃度對(duì)顯色效果起著至關(guān)重要的作用,每次選用新的二抗或在-80度冰箱拿分裝好的二抗最-好是每一次都做一個(gè)預(yù)實(shí)驗(yàn),設(shè)置不同的二抗?jié)舛群惋@色時(shí)間,從而確定相應(yīng)的條件,方可做好大規(guī)模的篩選細(xì)胞工作。

4.同種細(xì)胞株的ELISA孵育時(shí)間要保持一致,降低無關(guān)變量的影響。

5.各種抗體的保存最-好是在-80度冰箱,一定要將降低凍融次數(shù),蛋白比較敏感,凍融次數(shù)多,蛋白活性就會(huì)降低。

6.稀釋樣品時(shí)一定要保證混勻,槍尖在液面以下吹打相同的次數(shù),可防止出現(xiàn)氣泡。

7.分析數(shù)據(jù)的過程中,一般至少要5個(gè)點(diǎn),不然數(shù)據(jù)沒有相應(yīng)的說服力。

8.96孔板取完樣品后,蓋好,提早加好DPBS稀釋液,防止時(shí)間過長,樣品揮發(fā),濃度不準(zhǔn)。
免責(zé)聲明：
1.   試劑盒僅供研究使用，不得用于臨床實(shí)驗(yàn)或?qū)嶒?yàn)，否則所產(chǎn)生的一切后果，由實(shí)驗(yàn)者承擔(dān)，本公司概不負(fù)責(zé)。
2.   嚴(yán)格按照說明書操作，實(shí)驗(yàn)者違反說明書操作，后果由實(shí)驗(yàn)者承擔(dān)。
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