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羊白細(xì)胞介素5（IL-5）ELISA試劑盒 YQ-66790K
研玘生物elisa試劑盒原理:免疫分析是一種利用特定抗體與抗原或半抗原發(fā)生的高選擇性高特識(shí)別和結(jié)合原理,對(duì)待測(cè)抗體或者抗原進(jìn)行分析測(cè)定的方法,酶聯(lián)免疫吸附分析(下稱ELISA)是免疫分析的一種,分三個(gè)部分組成:免疫識(shí)別,信號(hào)輸出和數(shù)據(jù)處理。

步驟:免疫識(shí)別是在聚苯制成的96孔板上包被抗體,而后利用抗體識(shí)別待測(cè)的抗原(通常是的蛋白質(zhì)生物標(biāo)記物,病毒,細(xì)菌等等,從復(fù)雜待測(cè)液中將抗原吸附到96孔板表面。接著用帶有辣根化酶(Horseradish Peroxidase, HRP)、熒光或放射性標(biāo)記的抗體通過(guò)直接或者間接的方式輸出識(shí)別信號(hào)。最-后利用信號(hào)強(qiáng)度,標(biāo)準(zhǔn)樣品濃度梯度等信息計(jì)算得出待測(cè)樣中目標(biāo)抗原的濃度。

分類:根據(jù)免疫識(shí)別和信號(hào)輸出方式的不同,ELISA可以分為雙抗體夾心法、直接免疫競(jìng)爭(zhēng)法和非直接免疫競(jìng)爭(zhēng)法等等。其中雙抗體夾心法在商業(yè)應(yīng)用上最常見(jiàn)。

羊白細(xì)胞介素5（IL-5）ELISA試劑盒雙抗一步夾心法:

1.抗體包被 在96孔板上包被抗體。由于酶標(biāo)板是由聚苯制成,其含有的苯環(huán)與抗體的酸殘基具有類似π-π堆積作用的引力,結(jié)合靜電和疏水作用,可以將抗體吸附于其表面。然后,將未吸附的抗體用緩沖液清洗后,加入含有明膠或牛血清蛋白(Bovine Serum Albumin, BSA)的封閉液以封閉酶標(biāo)板上未結(jié)合抗體的部分。加入封閉液的目的,是防止其他蛋白因靜電或疏水作用吸附在96孔板上,造成假陽(yáng)性信號(hào),干擾后續(xù)實(shí)驗(yàn)的進(jìn)行。

2.免疫識(shí)別 在96孔板上包被抗體后,加入待測(cè)樣,并在37°C環(huán)境下孵育一段時(shí)間,通常是1-2小時(shí)。此時(shí)酶標(biāo)板上的抗體與待測(cè)抗原進(jìn)行特識(shí)別結(jié)合。此處抗體的質(zhì)量是關(guān)鍵,好的抗體既能特地結(jié)合抗原又不受待測(cè)樣中其他生物大分子、蛋白質(zhì)和無(wú)機(jī)鹽等成分的影響。

3.洗板 將未結(jié)合的抗原洗掉,加入該抗原所對(duì)應(yīng)的識(shí)別抗體并在37°C下繼續(xù)培養(yǎng)1-2小時(shí),接著將未連接上抗原的抗體洗掉。

4.酶標(biāo)信號(hào)輸出 加入帶有辣根化酶(Horseradish Peroxidase, HRP)標(biāo)記的酶標(biāo)二抗,用于和標(biāo)準(zhǔn)抗體結(jié)合。在培養(yǎng)30分鐘后洗掉未連接的二抗,并加入顯色劑顯色。根據(jù)顯色的結(jié)果判斷抗原的濃度。一般認(rèn)為,抗原濃度與顯色后的發(fā)光強(qiáng)度呈正相關(guān)。
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