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DPPH 自由基清除能力試劑盒說明書

發表時間:2024-02-23

DPPH 自由基清除能力試劑盒說明書

(50 管/48 樣) 

 一、產品簡介:
DPPH(1,1-Diphenyl-2-picrylhydrazyl radical)即 1,1-二苯基-2-苦基肼基自由基。廣泛用于定量測定生物試樣和食品的抗氧化能力。

此法是根據 DPPH 自由基有單電子,在 517nm 處有一強吸收,其醇溶液呈紫色的特性。當有自由基清除劑存在時,由于與其單電子配對而使其吸收逐漸消失,呈現的顏色越淺,即 A 值越低,進而對樣本中 DPPH 清除能力進行定量分析。

二、試劑組成與配置:

試劑名稱
規格
保存
備注
試劑一 
工作液粉劑×1 瓶
4℃避光
臨用前甩幾下使試劑落入底部,再加入 40mL無水乙醇充分溶解后備用;用不完的試劑 4℃避光保存
試劑二
標準品粉劑×1 支
 4℃
制作標準曲線用

三、所需儀器和用品:
可見光分光光度計、1mL 比色皿(光徑 1cm)、離心機、移液器、無水甲醇、無水乙醇、蒸餾水。
四、實驗步驟:
操作前請仔細閱讀第六點《注意事項》,了解相關注意點。
1、樣本前處理:
① 組織樣本:稱取約 0.1g 組織,剪碎,加入 1mL 的 80%甲醇溶液(或按樣本重量 g:80%甲醇溶液體積 mL 為1:10 或 1:5 的比例加),冰水浴勻漿,12000 轉/分鐘,離心 10 分鐘,取上清置冰上待測。
② 液體樣本:直接檢測,若渾濁,離心后取上清測定。
2、操作步驟:(EP 管中操作)


對照管
測定管
空白管
樣本(μL)
 400
 400

80%甲醇(μL)
600 

400 
工作液(μL)

600
600
混勻,室溫 25℃避光靜置 30min,4000 轉/分鐘離心 5 分鐘,波長 517nm,吸取 800μL 至比色皿中,無水乙醇調零,測定各管吸光度值。
注:做預試時若 A 測定-A 對照接近或小于 0.05,則需對樣本進行稀釋后再檢測,稀釋倍數代入公式計算;若樣本較多,建議分批次測定;空白管只需做 1-2 個)
五、結果計算:
1、標準曲線制作:
(將標準品粉劑一支加無水甲醇 2mL 溶解,即為 0.5mg/mL(Trolox)標準應用液,再用無水甲醇分別稀釋成 5μg /mL、10μg/mL、15μg /mL、20μg /mL、25μg /mL 參照下表代入操作)
標準品濃度(μg /mL)
0 5 10 15 20 25
標準液(μL)
400 400
400
400
400
400
工作液(μL)
600 600
600
600
600
600
混勻,室溫 25℃避光靜置 30min,波長 517nm,1cm 光徑,無水乙醇調零,測定各管吸光度

2、DPPH 自由基清除率(%)=(1-(A 測定-A 對照)÷A 空白)×100%
3、定義用從標準曲線算得的相當于抗氧化劑 Trolox 的量來表示樣本的 DPPH 自由基清除能力。
4、計算公式:


六、注意事項:
1、樣本測試前一定要進行預試,一方面了解本批樣品情況(或所需稀釋倍數),否則如果清除率太大(≥90),計算結果偏低;另一方面也可熟悉實驗流程,避免樣本與試劑的浪費;
2、標準曲線也可根據需要來調整標準濃度,上限不大于 25μg/mL;
3、因乙醇易揮發,所以不建議用酶標儀來讀數;
4、操作時應在一個通風條件良好的環境中進行,以免吸入過量甲醇中毒;
5、本試劑盒僅用于科研。

聯系方式
手機:19921913682
Q Q:
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